CellArits授權 iPSC單細胞克隆培養基試劑盒

產品名稱：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit         

產品貨號：Y30021

產品說明：

使用CRISPR / Cas9和人類誘導的多能干細胞（hiPS）進行精確，無足跡的基因編輯的*組合，可在產生疾病模型時提高復雜性，從而促進新療法的快速發展。

我們的CRISPR / Cas9系統是介導哺乳動物細胞中基因組編輯的一種簡單的，RNA可編程的方法；它可用于在hiPS細胞中產生基因敲除（通過插入/刪除）或敲除（通過HDR）。交付Cas9-sgRNA核糖核蛋白（RNP）復合物后，必須分離單個細胞并將其擴增為克隆細胞系，以分離和篩選目標基因型。傳統上，從作為集落生長和傳代的經過編輯的hiPS細胞建立克隆種群效率低下且耗時。通常，它會導致細胞死亡或過早分化。為克服這一挑戰，我們開發了完整的系統，該系統通過有效傳遞Cas9-sgRNA RNP復合物和hiPS細胞的單細胞克隆，將無足跡的基因編輯結合在一起。使用我們基于單層的培養系統可成功完成單細胞克隆

產品介紹：

人誘導多能干細胞（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一個功能強大的研究工具和疾病模型，因為其具備增殖、自我更新、分化為多種細胞類型的能力。此外，人iPS細胞還可以再現細胞來源個體的疾病表型和基因型。將人iPS細胞結合基于CRISPR/Cas9的基因編輯技術，可以在同基因的細胞系中研究特定基因改變引起的功能影響，因為基因編輯過的人iPS細胞能提供可再生的、無遺傳變異的患病細胞和健康細胞資源。

CRISPR/Cas9系統已經成為一個強大的基因編輯工具，因為其高的靶向特異性，編輯效率和易用性。該技術的強大主要源于它的簡單，因為全部只需要一個Cas9核酸酶結合一個單鏈向導RNA（single guide RNA，sgRNA) 就可以決定靶向特異性（Jinek et al. 2012)。這種RNA編程的（RNA-programmable）方法利用了非同源末端連接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修復途徑的易錯特性，進而產生基因敲除(通過插入/刪除)。這種方法也可以通過同源重組（homology-directed repair，HDR)途徑被用于基因敲入。

 CRISPR/Cas9系統的組件可以通過多種方法成功導入至靶細胞，包括基于載體的表達系統，RNA轉染, 導入Cas9/sgRNA核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP)復合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載體的方法相比，直接導入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉入基因編輯實驗的方法，同時脫靶效應的可能性更小（Kim et al. 2014)。

 一旦Cas9/sgRNA RNP復合物被導入，為了分離和篩選感興趣的基因型，單細胞必須被分離并擴增為克隆細胞系。傳統上,從基因編輯的hiPS細胞建立一個克隆群是低效的、具有挑戰性的和耗時的，因為hiPS 細胞是以集落生長和傳代的。通常，這會導致細胞死亡和提前分化。然而，Cellartis基因編輯和單細胞克隆系統包含一個成分確定的培養系統(由基礎培養基，包被劑，和添加劑組成)，用于有效形成單細胞克隆和擴增基因編輯后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一個基于單層培養的系統，規避了集落狀培養帶來的挑戰，允許單細胞傳代和促進接種的單細胞存活和后續擴增。

 Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完整的，在無飼養層和成分確定條件下，用于hiPSCs有效擴增和擴大生產的系統。試劑盒包含了從接種單細胞至96孔板到擴增至48孔板過程中所有必要的試劑。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續培養。

 Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一個完整的系統，允許通過電穿孔的方法對hiPSCs進行有效的基因編輯以及隨后的單細胞克隆形成和擴增至48孔板。該系統中提供了重組Cas9蛋白質，以及產生大量sgRNAs所有必要的試劑，用于電穿孔hiPSCs。系統中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 組份，用于進行基因編輯后的單細胞克隆形成和擴增。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續培養。

 Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一個完整的系統，允許通過gesicle導入Cas9/sgRNA復合物進行有效的基因編輯隨后的單細胞克隆形成和擴增至48孔板。Gesicles是一種無毒的、高效的、替代電穿孔的方法，不依賴昂貴的設備或耗材。系統中提供所有的必要試劑用于產生細胞衍生的納米囊泡（稱做gesicles），來轉導Cas9和sgRNA至hiPSCs。系統中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）組份，用于進行基因編輯后的單細胞克隆形成和擴增。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續培養。

 ■ 產品特點

·在hiPSC中進行高效的基因編輯—使用電穿孔或囊泡來遞送Cas9蛋白和sgRNA，而沒有基因組整合并且降低脫靶效應

·優異的單細胞存活率—編輯的hiPSC植入96孔板中的單個細胞

·編輯后和單細胞克隆期間保持多能性-hiPSC維持多能性標記Oct-4，TRA-1-60和SSEA-4的高水平（> 90％）

·穩定的核型從頭到尾—在編輯，單細胞克隆和擴增過程中保持正常且穩定的核型

·靈活地按自己的方式進行基因編輯實驗-選擇完整的試劑盒，該試劑盒可以使用基于電穿孔的（Code No. 632643）或基于囊泡的（Code No. 632642）CRISPR / Cas9技術提供編輯和單細胞克隆解決方案，或者在您自己的編輯實驗后，利用培養基試劑盒（代碼Y30021）執行有效的單細胞克隆

·在整個基因編輯/單細胞克隆實驗中繼續使用DEF-CS技術-使用Cellartis DEF-CS 500培養系統（代碼編號Y30010）在基因編輯實驗之前和之中，然后在單細胞克隆實驗之后放大期間

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CellArtis  Y30010     DEF-CS 500 Culture System,DEF-CS 500培養系統，人iPS和人ES增殖用培養基  1套

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Cellartis品牌擁有超過15年的豐富經驗，可為涉及干細胞的研究應用提供產品和服務。該品牌源自同名公司（現為Takara Bio Europe AB），該公司由哥德堡大學的研究人員于2001年成立。從歷*看，Cellartis品牌的主要關注點是開發和分配干細胞系，包括用于人類或普通用途的人類胚胎干細胞（hESCs）和人類誘導的多能干細胞（hiPSC）。近，該品牌的范圍已擴大到還包括諸如培養系統，培養基和試劑之類的產品，這些產品使我們的專業知識和創新技術更容易為生命科學研究人員所使用。該品牌的重要里程碑涉及Cellartis DEF-CS培養系統的開發和商業化，這是一種培養干細胞的革命性方法，相對于其他方法，它具有明顯的優勢。

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重慶市華雅干細胞技術有限公司是中國中西部地區*家專業從事生物技術產品銷售（包括：生物試劑、生物耗材、儀器設備、技術產品等）、干細胞儲存、干細胞相關基礎研究、干細胞臨床應用研究及技術服務的高新技術企業。供應造血干細胞培養基，神經干細胞培養基，干細胞無血清培養基，胚胎/IPS干細胞無血清培養基，心肌細胞分化培養基，外周血核型分析培養基。公司立足西南，面向全國，以“積極借鑒成功經驗，追求創新”為核心思想，將為客戶提供水平的干細胞產品和服務。

“華雅干細胞”是由我們公司的全體員工用心打造的一塊金質招牌，我們的團隊：富有激情、相互信任、目標*、熱愛干細胞事業、用心為我們的干細胞客戶服務。干細胞產業的蓬勃發展需要產業鏈中的每個成員精耕細作，協同發展，實踐創新。

華雅干細胞公司立志為中國干細胞產業的進步與發展做出應有的貢獻，為人類健康事業更上一層樓而不懈努力！

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