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    BeYaMA 1 人多能干細(xì)胞無血清培養(yǎng)液 Juvi Human iPSC/ESC Growth

    簡要描述:BeYaMATM 1 訂購信息
    JuviTM Human iPSC/ESC Growth Medium
    BeYaMATM 1COMPONENTVOLUMESTORAGE
    500mL Complete Medium(貨號(hào):HJ0101M)

    • 產(chǎn)品型號(hào):BeYaMA 1
    • 廠商性質(zhì):代理商
    • 更新時(shí)間:2025-02-13
    • 訪  問  量:2102
    詳細(xì)介紹
    品牌HY StemCell/華雅干細(xì)胞

    BeYaMATM 1 訂購信息

    JuviTM  Human iPSC/ESC Growth Medium

    BeYaMATM 1

    COMPONENT

    VOLUME

    STORAGE

    500mL Complete Medium(貨號(hào):HJ0101M

    BeYaMATM 1  Basal Medium(貨號(hào):HJ0102M

    400mL

    Store at 28

    BeYaMATM 1  5X Supplement(貨號(hào):HJ0103M

    100mL

    Store at -20



    BeYaMATM 1

    JuviTM  Human iPSC/ESC Growth Medium

    人多能干細(xì)胞無血清培養(yǎng)液*實(shí)驗(yàn)操作手冊(cè)

    • 培養(yǎng)皿包被
    1. 4℃溶解MatrigelBD 354277)6小時(shí),輕搖混勻。請(qǐng)注意:原液應(yīng)是均質(zhì)粘稠的半流體狀態(tài),要避免溫度過高,否則Matrigel會(huì)變成凝膠狀態(tài)。
    2. 冰上預(yù)冷1.5ml離心管和移液器槍頭,冰上快速將Matrigel分裝成350-500ul/支,儲(chǔ)存于-80℃,用前置于4℃解凍。
    3. 將溶解的Matrigel加入25ml預(yù)冷的無血清DMEM/F12培養(yǎng)基中,輕輕混勻,避免產(chǎn)生氣泡。
    4. 將稀釋的Matrigel加入六孔板中,1ml/孔,輕搖培養(yǎng)板,使Matrigel均勻鋪在培養(yǎng)板底部。
    5. Parafilm封好包被的培養(yǎng)板,至于4℃儲(chǔ)存,用前置于37℃培養(yǎng)箱中孵育至少1小時(shí)。
    • 培養(yǎng)液準(zhǔn)備
    1. 4℃解凍BeYaMATM 1 5X Supplement(貨號(hào):HJ0103M添加劑,加入BeYaMATM 1 Basal Medium(貨號(hào):HJ0102M基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,形成500mL BeYaMATM 1 Complete Medium(貨號(hào):HJ0101M)*培養(yǎng)基。
    2. BeYaMATM 1*培養(yǎng)基可在4℃穩(wěn)定儲(chǔ)存2周。可按實(shí)際用量將BeYaMATM 1*培養(yǎng)基分裝后置于-80-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
    • hESCs/hiPSCs復(fù)蘇
    1. 復(fù)蘇hESCs/hiPSCs前,復(fù)溫Matrigel包被的培養(yǎng)板,吸棄孔內(nèi)液體,加入2ml BeYaMATM 1*培養(yǎng)液及2ul 5uM/L Rock Inhibitor Y27632,用以促進(jìn)細(xì)胞貼壁。
    2. 從液氮罐中取出hESCs/hiPSCs凍存管,浸入37℃水浴,輕輕搖晃,直到細(xì)胞融化至僅剩一小塊冰晶,迅速取出并用75%酒精擦拭凍存管外表面,轉(zhuǎn)移至無菌超凈臺(tái)中。
    3. 將細(xì)胞懸液接種至準(zhǔn)備好的培養(yǎng)板中,輕輕晃動(dòng)使細(xì)胞均勻分布在板底。
    4. 小心將培養(yǎng)板放置于培養(yǎng)箱中,避免振動(dòng)。
    5. 30-90min后顯微鏡下觀察細(xì)胞基本貼壁,更換新鮮BeYaMATM 1*培養(yǎng)液,之后每24h換液,4-6天后傳代。
    • hESCs/hiPSCs傳代
    1. 提前準(zhǔn)備好MatrigelBD 354277)包被過的六孔板,吸棄孔內(nèi)包被液,加入2ml BeYaMATM 1*培養(yǎng)液。
    2. 吸棄待傳代hESCs/hiPSCs孔內(nèi)的培養(yǎng)液,并用1ml無鈣鎂的PBS1遍。
    3. 加入0.5ml Accutase細(xì)胞分離液使之*覆蓋皿底。
    4. 室溫孵育5-8分鐘或37℃孵育3-5分鐘,顯微鏡下觀察到大部分克隆細(xì)胞間出現(xiàn)間隙,細(xì)胞表面發(fā)亮但尚未相互分離時(shí),可吸去Accutase
    5. 可將培養(yǎng)板放置37℃繼續(xù)孵育1min,或者直接加入適量新鮮BeYaMATM 1*培養(yǎng)液,輕輕搖晃,干細(xì)胞集落基本脫落。亦可用細(xì)胞刮刀將剩余克隆輕輕刮下,盡量避免用槍頭反復(fù)吹打細(xì)胞。
    6. 將制備好的細(xì)胞懸液按13 - 16的比例接種至準(zhǔn)備好的培養(yǎng)板中,注意細(xì)胞過密則克隆邊界不圓滑,易分化,細(xì)胞過稀則克隆存活率降低。
    7. 輕輕搖晃培養(yǎng)板讓細(xì)胞均勻分散,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6小時(shí)。
    8. 每天更換培養(yǎng)液,待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上,或者克隆中央密度過大,影響細(xì)胞生長時(shí)進(jìn)行傳代。



    如果您在使用BeYaMATM 1  JuviTM Human iPSC/ESC Growth Medium 人多能干細(xì)胞無血清培養(yǎng)液的過程中,有任何技術(shù)問題,我們開通了Juvi科學(xué)家技術(shù)團(tuán)隊(duì),歡迎您發(fā)郵件到Juvi@hystemcell.com 進(jìn)行交流溝通,我們的目標(biāo)是:推動(dòng)中國iPS干細(xì)胞技術(shù)走向產(chǎn)業(yè)和臨床!

     


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