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    PeproTech 重組人IFN-γ (Animal Free)

    簡(jiǎn)要描述:PeproTech 重組人IFN-γ (Animal Free)
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    • 產(chǎn)品型號(hào):AF-300-02
    • 廠商性質(zhì):代理商
    • 更新時(shí)間:2025-02-13
    • 訪  問  量:2328
    詳細(xì)介紹
    品牌PeproTech供貨周期現(xiàn)貨
    應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

    生產(chǎn)商          產(chǎn)品名稱                                        產(chǎn)品編號(hào)         產(chǎn)品規(guī)格
    PeproTech 重組人Flt-3 Ligand (Animal Free)    AF-300-19 10ug/50ug/100ug/250ug/500ug/1mg
    PeproTech 重組人IL-7 (Animal Free)      AF-200-07 10ug/100ug/250ug/500ug/1mg
    PeproTech 重組人IL-15 (Animal Free)    AF-200-15 10ug/100ug/250ug/500ug/1mg
    PeproTech 重組人SCF (Animal Free)       AF-300-07 10ug/50ug/100ug/250ug/500ug/1mg
    PeproTech
    (BioGems)  人CD28 激發(fā)型單抗 (極低內(nèi)毒素)   (克隆:CD28.2)    10311-25 100ug/500ug

    生產(chǎn)商         產(chǎn)品名稱                     產(chǎn)品編號(hào)          產(chǎn)品規(guī)格        使用濃度
    PeproTech 重組人IFN-γ (Animal Free) AF-300-02 100ug/250ug/500ug/1mg 50ng/ml
    PeproTech 重組人IL1-α (Animal Free) AF-200-01A 10ug/100ug/250ug/500ug/1mg 0.1ng/ml
    PeproTech 重組人IL-2 (Animal Free) AF-200-02 50ug/100ug/250ug/500ug/1mg 30ng/ml
    PeproTech (BioGems)    人CD3 激發(fā)型單抗 (極低內(nèi)毒素)  (克隆:OKT-3)05121-25 100ug/500ug 50ng/ml

    注:Animal Free 意為無動(dòng)物成分。無動(dòng)物成分的重組細(xì)胞因子在生產(chǎn)過程中不會(huì)有任何動(dòng)物源性物質(zhì),尤其是牛蛋白
    的混入,使得zui終獲得的重組人蛋白中不含任何動(dòng)物成分。這樣可避免動(dòng)物病原體(如瘋牛病,克雅氏病等)的污染
    及外源蛋白引起的機(jī)體異種排斥和過敏反應(yīng),因此細(xì)胞治療的體外細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用無動(dòng)物成分的重組細(xì)胞
    因子。

    【參考文獻(xiàn)】
    [1] Li R, Wang C, et al. Autologous cytokine-induced killer cell immunotherapy in lung cancer:
    a phase II clinical study. Cancer Immunol Immunother. 2012; 61:2125–2133

    CIK 細(xì)胞的制備方法:

    【背景】
    CIK 是“Cytokine-Induced Killer Cells"的縮寫,中文全稱為“細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞"。
    CIK 是單個(gè)核細(xì)胞在CD3 單抗和多種細(xì)胞因子(包括IFN-γ, IL-2 等)的作用下培養(yǎng)獲得的一
    群以CD3+CD56+細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)胞的異質(zhì)細(xì)胞群, 其既具有T 淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活
    性,又具有NK 細(xì)胞(自然殺傷細(xì)胞)的非MHC(主要組織相容性抗原)限制性腫瘤殺傷能力。
    CIK 細(xì)胞具有殺瘤活性高、殺瘤譜廣,對(duì)正常組織毒性低,體外可高度擴(kuò)增等特點(diǎn),是目前
    臨床上廣泛使用的過繼性免疫-治療細(xì)胞。

    【培養(yǎng)原理】
    CIK 培養(yǎng)用細(xì)胞因子和抗體:
    ?? CD3 激發(fā)型單抗:

    T 細(xì)胞活化的*信號(hào)來自于T 細(xì)胞表面的受體,即T 細(xì)胞抗原受體(T cell antigen
    receptor, TCR)與APC 提呈的抗原的特異性結(jié)合,也就是T 細(xì)胞對(duì)抗原的特異性識(shí)別。
    TCR 是由2 條不同肽鏈構(gòu)成的異二聚體,在T 細(xì)胞表面,其與CD3 分子通過非共價(jià)鍵
    結(jié)合,形成TCR/CD3 復(fù)合體。TCR 識(shí)別特異性抗原后會(huì)引起CD3 和T 細(xì)胞表面的輔助
    受體CD4 或CD8 分子的胞漿尾部聚集,進(jìn)而激活與胞漿尾部相連的酪-氨酸激酶(Lck, Fyn
    和ZAP-70 等),促使CD3 分子胞漿區(qū)的免疫受體酪-氨酸活化基序(immunoreceptor
    tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪-氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪-氨酸(pY)進(jìn)一步
    磷酸化下游含酪-氨酸的蛋白,從而引起激酶活化的級(jí)聯(lián)反應(yīng)(磷脂酰肌醇途徑或MAP 激
    酶途徑等),zui終通過激活轉(zhuǎn)錄因子,使其進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),結(jié)合于調(diào)控T 細(xì)胞增殖和活
    化的靶基因(如IL-2 和IFN-γ等),引起基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄,T 細(xì)胞因而由靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)為
    增殖和活化狀態(tài)。

    由上可見,CD3 分子在T 細(xì)胞活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)中起著極其關(guān)鍵的作用。CD3 激發(fā)
    型單抗與T 細(xì)胞表面CD3 分子特異性結(jié)合后,可引起CD3 分子胞漿區(qū)ITAM 基序中酪
    -氨酸的磷酸化,進(jìn)而導(dǎo)致T 細(xì)胞增殖和活化的下游信號(hào)的激活,從而使T 細(xì)胞增殖和活
    化。也就是說,CD3 激發(fā)型單抗能夠模擬抗原與TCR/CD3 復(fù)合物的識(shí)別和激活過程,
    從而引起T 細(xì)胞的增殖與活化,因此是CIK 細(xì)胞培養(yǎng)中*的刺激因素。

    此外,CD3 激發(fā)型單抗在選用時(shí)一定要注意克隆號(hào)。研究表明,僅克隆號(hào)為OKT-3
    的CD3 激發(fā)型單抗可以刺激所有人的T 細(xì)胞的增殖,而其它克隆號(hào)的CD3 激發(fā)型單抗
    僅能刺激一部分人的T 細(xì)胞。因此,在進(jìn)行CIK 培養(yǎng)時(shí),選用OKT-3 克隆,以保
    證每個(gè)患者的T 細(xì)胞均能被激活。

    ?? IL-2 (白細(xì)胞介素-2)
    IL-2 zui初發(fā)現(xiàn)時(shí)被稱為T 細(xì)胞生長(zhǎng)因子(T cell growth factor, TCGF),是引起T 細(xì)胞
    增殖zui重要的細(xì)胞因子。IL-2 既是自分泌細(xì)胞因子,也是旁分泌細(xì)胞因子,其通過與T

    細(xì)胞表面的IL-2 受體(IL-2R)的特異性結(jié)合而促使T 細(xì)胞活化,并進(jìn)入細(xì)胞分裂狀態(tài)。
    此外,IL-2 還可刺激NK 細(xì)胞的生長(zhǎng)并增強(qiáng)其殺傷能力。因此CIK 細(xì)胞培養(yǎng)中須添加
    IL-2,以促進(jìn)T 細(xì)胞的增殖與活化。
    ?? IFN-γ (干擾素-γ)
    IFN-γ 具有上調(diào)外周血淋巴細(xì)胞表面IL-2R表達(dá)的作用,因此會(huì)增強(qiáng)T細(xì)胞對(duì)IL-2促
    增殖反應(yīng)的敏感度和強(qiáng)度。在誘導(dǎo)CIK細(xì)胞形成的過程中加入IFN- γ ,可降低IL-2的用量。
    研究發(fā)現(xiàn),IFN-γ加入的順序與CIK的細(xì)胞毒活性密切相關(guān)。先加入IFN- γ,培養(yǎng)24后再
    加入IL-2,可明顯提高CIK的細(xì)胞毒活性。

    ?? IL-1α(白細(xì)胞介素-1α)
    IL-1α也可以介導(dǎo)外周血淋巴細(xì)胞表面上調(diào)表達(dá)IL-2R。當(dāng)IL-1α與IFN-γ和激發(fā)型
    CD3 單抗合用時(shí),可以明顯提高CIK 的細(xì)胞毒作用。

    【細(xì)胞制備】
    1. 外周血單個(gè)核細(xì)胞的采集
    1.1 用血細(xì)胞分離機(jī)采集患者自身的外周血單個(gè)核細(xì)胞50-100mL;
    1.2 淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法進(jìn)一步純化單個(gè)核細(xì)胞(PBMC);
    1.3 無血清培養(yǎng)液洗滌2 次,獲得純度在90%以上的PBMC。

    2. CIK 細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定
    2.1 將PBMC 按1-2 x 106/ml 的濃度懸浮于無血清培養(yǎng)液中,加入1,000 U/ml 的重組
    人IFN-γ,37oC,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
    2.2 24h 后加入50ng/ml 的CD3 單克隆抗體和300 U/ml 的重組人IL-2,刺激CIK 細(xì)
    胞的生長(zhǎng)和增殖;
    注:此時(shí)也可同時(shí)加入100 U/ml 的重組人IL-1α。
    2.3 每3 天半量換液或擴(kuò)瓶一次,并補(bǔ)加重組人IL-2 300 U/ml;
    2.4 在培養(yǎng)的第14d,收獲CIK 細(xì)胞。
    2.5 CIK 細(xì)胞質(zhì)控:
    2.9.1 臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè):活細(xì)胞應(yīng)在80%以上;
    2.9.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面CD3、CD8、CD56 等分子的表達(dá):CD3+CD56+細(xì)
    胞的比例應(yīng)在20%以上。
    2.9.3 細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn):以CIK 細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,以腫瘤細(xì)胞(可為原代腫瘤細(xì)胞或
    腫瘤細(xì)胞株)為靶細(xì)胞,將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按10 : 1(數(shù)目比) 的比例加入
    96 孔U 型板中,每孔含靶細(xì)胞1 x 104 個(gè),終體積為200 μl,設(shè)3 個(gè)復(fù)孔。
    培養(yǎng)4h,然后取培養(yǎng)上清,用乳酸脫氫酶(LDH) 試劑盒檢測(cè)效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶
    細(xì)胞的殺傷率。
    2.9.4 收獲細(xì)胞前,取少量培養(yǎng)物進(jìn)行細(xì)菌、真菌培養(yǎng),并檢測(cè)支原體、衣原體,
    及內(nèi)毒素(標(biāo)準(zhǔn):病原學(xué)檢測(cè)陰性,內(nèi)毒素<5 Eu)。


     


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