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    細(xì)胞凍存解決方案

    更新時(shí)間:2015-12-08 點(diǎn)擊次數(shù):3102
     細(xì)胞凍存解決方案
    細(xì)胞凍存步驟
    1.預(yù)先配制凍存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存預(yù)冷; 2.用胰酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化:倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,PBS沖洗兩次,用胰酶消化細(xì)胞(盡可能溫和); 3.再次用*培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞,將預(yù)冷的凍存液加入消化*的細(xì)胞中,用滴管輕輕吹打混勻。 4.在每支凍存管中加入1ml細(xì)胞液,密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。 5.凍存步驟的細(xì)致直接關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的活力,如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過(guò)夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐。

    解決方案
    1.凍存液:A:dmso 推薦 sigma (貨號(hào)D2650-100ml) B:胎牛血清根據(jù)自己習(xí)慣 1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高壓 滅菌 2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存.. 3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比) 2.胰酶(hyclone 貨號(hào) sh30042.01) pbs (hyclone 貨號(hào)sh30256.01b) 培養(yǎng)瓶,離心管 推薦coring 或者 falcon 槍頭 推薦axygen (axygen槍頭已經(jīng)基本國(guó)產(chǎn)化) 3.凍存管 推薦axygen的彩色凍存管,有各種顏色的蓋子,方便分類。且性價(jià)比較高。目前市場(chǎng)上nunc 和corning的一次性凍存管使用也很廣泛,但如果量大不如axygen凍存管劃算。現(xiàn)在還提供底部印有二維碼的方便識(shí)別的凍存管。 4.凍存盒:推薦使用biologix的紙質(zhì)凍存盒,標(biāo)注清晰,書(shū)寫(xiě)后不容易掉色,且有各種顏色可選。同時(shí)也 有塑料凍存盒供使用。質(zhì)量高,價(jià)格低。 5.程序降溫盒:推薦 nalgene(貨號(hào) 5100-0001)。使用zui廣,*的程序降溫盒。 6.液氮罐:根據(jù)需求,1000個(gè)樣本的儲(chǔ)存空間,推薦金鳳的yds-50b-125,含6個(gè)6層25孔方提桶,保 護(hù)罩及一只真空安全帽,含不銹鋼盒,zui多放900只樣本。 7.另外還有冷凍記號(hào)筆,不銹鋼凍存盒架,細(xì)胞濾網(wǎng),凍存管支架等等。

    液氮罐使用注意事項(xiàng):
    1. 容器的使用維護(hù):充液氮前要用少量的液氮預(yù)冷;補(bǔ)充液氮的時(shí)機(jī)是液氮剩余量為總?cè)萘康?/3為宜; 嚴(yán)禁在容器蓋上放置物體和密封瓶口;嚴(yán)防敲擊碰撞。 2. 不能用其他塞子代替罐蓋,更不能密封塞子,以免液氮蒸發(fā),壓力增高,損傷容器;檢查容器液 面高度時(shí),應(yīng)用塑料小棒或?qū)嵭男∧景舨迦氲撞浚^(guò)5-10s后取出,結(jié)霜的長(zhǎng)度即為液面高度。

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