• 服務(wù)熱線

    15021010459
    技術(shù)文章
    當(dāng)前位置:主頁 > 技術(shù)文章 > 羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方式

    羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方式

    更新時(shí)間:2014-09-22 點(diǎn)擊次數(shù):2484
    一、羊水細(xì)胞培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)法
     
    1、采樣:選擇妊娠13-14周婦女,在無菌條件下抽取羊水5ml,立即注入無菌離心管中。
    2、收集:離心分離細(xì)胞,1000rpm10分鐘,去上清,留0.5ml,輕打混勻。
    3、接種:將混勻的羊水細(xì)胞種置于50ml或100ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi),平均10ml羊水細(xì)胞收集的細(xì)胞種置一瓶加5-10ml混合培養(yǎng)液。
    4、培養(yǎng):酒精燈火先封口,靜置培養(yǎng)48小時(shí)后觀察細(xì)胞貼臂及生長情況,5-10天后可見瓶底面有大量羊水細(xì)胞生長。
    5、終止培養(yǎng):當(dāng)有大量圓形發(fā)亮細(xì)胞出現(xiàn)時(shí),加秋水仙素0.02-0.04ug/ml,作用10-12小時(shí)。
    6、細(xì)胞收集:將培養(yǎng)液倒入一干凈離心管中,加0.025%的胰蛋白酶0.5-1ml/瓶,輕輕搖動,使培養(yǎng)瓶底面*接觸消化酶,然后用彎頭吸管吹打,待細(xì)胞全部脫落后加前培養(yǎng)液終止胰蛋白酶消化。用吸管移細(xì)胞懸液于離心管中。1000-2000rpm10分鐘,棄上清,留細(xì)胞沉慮。若一次消化不*,可反復(fù)消化。
    7、低滲及預(yù)固定:加預(yù)溫37℃KCL溶液10ml,37℃溫育30分鐘,加0.5-1ml新鮮配制的3∶1甲醇冰乙酸固定液預(yù)固定,用氣泡吹打細(xì)胞使其混勻。
    8、固定:用新鮮配制的3∶2甲冰固定三次,每次30分鐘。固定液加入時(shí)沿管壁緩慢加入。
    9、制片及干燥:用絨毛制片。
    10、分帶處理。
     
    二、羊水細(xì)胞培養(yǎng)基蓋玻片培養(yǎng)法
     
    1、采樣:選擇妊娠13-14周婦女,在無菌條件下抽取羊水5ml,立即注入無菌離心管中。
    2、收集:離心分離細(xì)胞,1000rpm10分鐘,去上清,留0.5ml,輕打混勻。
    3、接種:30mm培養(yǎng)皿中放蓋玻片1張,每片滴混勻的細(xì)胞液1-2滴,置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30-60分鐘。
    4、培養(yǎng):取出后從蓋玻片外加培養(yǎng)液2ml,靜置培養(yǎng)48小時(shí)后觀察細(xì)胞生殖狀況并定時(shí)換液,5-10天后,可見大量成纖維細(xì)胞或上皮樣細(xì)胞生長。
    5、終止培養(yǎng):當(dāng)有大量圓形發(fā)亮細(xì)胞出現(xiàn)時(shí),加秋水仙素0.02-0.04ug/ml,作用10-12小時(shí)。
    6、低滲:倒掉培養(yǎng)液,加預(yù)溫37℃0.075MKCL溶液5ml,37℃溫育30分鐘,鏡下可見脹大的羊水細(xì)胞,加0.5-1ml 3∶1甲醇:冰醋酸固定液預(yù)固定。
    7、固定:倒掉低滲液,加5ml固定液固定30分鐘以上,反復(fù)3次。
    8、干燥:將附有細(xì)胞的蓋玻片斜放于培養(yǎng)皿中,置80℃烤箱處理2-3小時(shí)。
    9、膠片:將附有細(xì)胞的蓋玻片用樹脂膠封固于玻片上,正面朝外,小心細(xì)胞破壞。
     

    2025 版權(quán)所有 © 重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司  備案號:渝ICP備14000349號-4 sitemap.xml 管理登陸 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)

    地址:重慶市江北區(qū)金渝大道153號8棟20-14 傳真:023-63419626 郵件:sales@ys-bio.com

    重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司主要經(jīng)營干細(xì)胞研究 干細(xì)胞治療產(chǎn)品 生物試劑 實(shí)驗(yàn)耗材 藥物研發(fā)等產(chǎn)品。

    關(guān)注我們

    服務(wù)熱線

    400-021-2200

    掃一掃,關(guān)注我們

    主站蜘蛛池模板: 精品乱码久久久久久夜夜嗨| 亚洲国产精品无码久久久久久曰 | 精品福利一区二区三区免费视频| 久久精品国产一区二区三区日韩| 无码日韩精品一区二区人妻 | 精品欧美一区二区在线观看 | 精品日本一区二区三区在线观看| 国产精品视频一区二区三区无码| 久草欧美精品在线观看| 97精品人妻系列无码人妻| 亚洲av无码国产精品色在线看不卡 | 国产乱人伦偷精品视频不卡| 91久久婷婷国产综合精品青草| 亚洲一级Av无码毛片久久精品| 国产精品成人小电影在线观看| 国产精品高清一区二区人妖| 亚洲av无码国产精品夜色午夜| 久久久久久青草大香综合精品| 91精品国产91久久| 精品国产第1页| 99久久久精品免费观看国产| 亚洲国产精品va在线播放| 欧美成人精品第一区二区| 国产精品毛片一区二区| 久久99国产精品久久99| 国产午夜精品无码| 亚洲国产精品嫩草影院在线观看| 久久精品二区| 国产呦小j女精品视频| 亚洲综合精品一二三区在线| 国产99re在线观看只有精品| 国语自产少妇精品视频| 亚洲Av无码精品色午夜| 中文字幕久精品免费视频| 欧美精品一区二区在线精品| 精品精品国产欧美在线小说区| 国产精品无码免费专区午夜| 91精品国产综合久久香蕉 | 免费精品精品国产欧美在线| 精品久久久久久久中文字幕 | 亚洲国产精品ⅴa在线观看|