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    ProteanFect 助力實(shí)現(xiàn)小鼠原代T細(xì)胞近100%基因編輯

    更新時間:2025-01-10 點(diǎn)擊次數(shù):423

    當(dāng)前免疫學(xué)研究多采用免疫健全的小鼠模型,小鼠原代免疫細(xì)胞已成為關(guān)鍵工具。 然而,小鼠原代免疫細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染一直面臨低效率、高死亡率等技術(shù)難題。 現(xiàn)有的轉(zhuǎn)染方法 (如慢病毒、電轉(zhuǎn)、脂質(zhì)體等) 在這些細(xì)胞中效果不佳,特別是在基因編輯等涉及大片段基因遞送的研究中,這一瓶頸尤為明顯。

    為突破這一技術(shù)難關(guān),西湖凝聚體與西湖大學(xué)的研究團(tuán)隊聯(lián)合開發(fā)了ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒。該創(chuàng)新系統(tǒng)采用全新核酸遞送策略,成功解決了傳統(tǒng)方法的局限,能夠 高效遞送大片段核酸,實(shí)現(xiàn)小鼠原代免疫細(xì)胞的高效基因編輯。

    用戶親證:在小鼠原代 T 細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高達(dá) 97% 的基因編輯效率

    圖1. ProteanFect CRISPRMax實(shí)現(xiàn)在小鼠原代T細(xì)胞的高效基因編輯

    上述結(jié)果來源于陸·軍軍醫(yī)大學(xué)的研究者,研究中使用了 ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 (PT06) 。在該實(shí)驗中,小鼠原代 T 細(xì)胞共轉(zhuǎn)染了 Cas9 mRNA、目的基因 sgRNA 和 EGFP-mRNA (其中EGFP mRNA用于目標(biāo)細(xì)胞的篩選) ,成功實(shí)現(xiàn)了以下效果:

    1、高轉(zhuǎn)染效率:在總細(xì)胞中, 79.5% 的細(xì)胞實(shí)現(xiàn)目的基因敲除 ;而在 EGFP 陽性 T 細(xì)胞中, 97% 的細(xì)胞實(shí)現(xiàn)目的基因敲除 ,基因敲除效·果顯·著。

    2、高效共轉(zhuǎn):可利用篩選標(biāo)簽 (如EGFP、Puro等) 方便地富集成功基因編輯的細(xì)胞。

    3、低細(xì)胞毒性:實(shí)驗結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染后的小鼠T細(xì)胞生存率高,且生理功能未受影響。

    ProteanFect 何以如此高效?

    ProteanFect 創(chuàng)新基因遞送方式

    ProteanFect CRISPRMax 采用了一種創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù):ProteanFect 通過將蛋白分子和核酸自組裝成一種規(guī)則的納米顆粒,這些納米顆粒能夠通過細(xì)胞的主動內(nèi)吞機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。這些顆粒穩(wěn)定而功能強(qiáng)大,可以保護(hù) mRNA 免于降解并保持其活性。此外,這種設(shè)計無需額外的化學(xué)修飾,從而減少了細(xì)胞毒性,顯著提升實(shí)驗的安全性。

    圖2. ProteanFect蛋白分子與mRNA可在體外自組裝形成蛋白納米顆粒

    ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯原理

    1、通過共轉(zhuǎn)染 Cas9 mRNA 與 sgRNA,成功表達(dá) Cas9 蛋白。

    2、Cas9 蛋白與 sgRNA 在細(xì)胞內(nèi)自組裝形成 RNP 復(fù)合物。

    3、RNP 復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核并實(shí)現(xiàn)高效基因編輯。

    圖3. ProteanFect核酸遞送原理示意圖

    ProteanFect與傳統(tǒng)技術(shù)的對比

    ProteanFect 無需使用病毒載體或電轉(zhuǎn)技術(shù),避免了病毒可能帶來的免疫反應(yīng)和安全風(fēng)險,也避免了電轉(zhuǎn)對細(xì)胞的損傷。ProteanFect 與其他常用轉(zhuǎn)染方法的對比 :

    ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯卓·越優(yōu)勢:

    高效性能——轉(zhuǎn)染效率可達(dá) 70%-95% ,可同時遞送多種核酸,共表達(dá)率超 90% , 適用于人源和小鼠原代免疫細(xì)胞 ;

    卓·越安全性—— 非病毒、非電轉(zhuǎn)、非脂質(zhì)體設(shè)計,基于內(nèi)源蛋白,生物相容性極·佳,顯著降低細(xì)胞損傷;

    操作便捷—— 標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗流程,無需復(fù)雜的預(yù)處理步驟,可重復(fù)性高;

    系統(tǒng)靈活——不受細(xì)胞數(shù)量限制,從 103 – 108 個細(xì)胞都可以轉(zhuǎn)染。

    圖4. 使用ProteanFect CRISPRMax Cas9試劑盒在人原代T細(xì)胞和小鼠原代T細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高效基因標(biāo)記,基因編輯效率范圍為 67%-88% 。

    ProteanFect 的廣泛應(yīng)用

    ProteanFect 不僅在小鼠原代T細(xì)胞中表現(xiàn)卓·越,還能應(yīng)用于以下領(lǐng)域:

    小鼠原代免疫細(xì)胞的基因編輯(NK細(xì)胞、γδ T 等免疫細(xì)胞),以及人源化小鼠免疫細(xì)胞

    人原代免疫細(xì)胞基因編輯

    疾病模型構(gòu)建

    高通量的靶點(diǎn)篩選

    圖5. 用戶對于ProteanFect的認(rèn)可

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