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    Cygnus Vero細胞HCP ELISA檢測試劑盒的檢測原理

    更新時間:2023-02-01 點擊次數:1145
    CygnusVeroCellHCPELISAKitVero細胞HCP試劑盒檢測原理:  
    VeroCell檢測是一個雙位點酶聯免疫檢測。樣本中包含的VeroCellHCPs蛋白與標記有抗-VeroCell抗體的辣根過氧化物酶同時反應,反應發生在之前涂有一層吸附性抗-VeroCell蛋白抗體的微量滴定板中進行。免疫反構成為夾層式結構:固相抗休-HCP-酶標記抗體。反應結束后清洗微量滴定板去除未結合反應物。添加TMB作用底物反應。微量滴定板讀數器上測定水解物濃度,水解物濃度與VeroCellHCPs蛋白濃度成比例。用提供的標準液繪制標準曲線,根據讀數可以計算出VeroCellHCPs蛋白含量。  
    檢測過程:  
    取出所有試劑平衡到室溫→分別移取50µl標準液,對照物和樣品至待測孔→移取100µlanti-VeroCell:HRP(#F501)至每孔→密封滴定板,搖床室溫溫育2小時,180rpm→清空小孔,用紙吸干殘留液,350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µlTMB作用物(#F005)→室溫靜置30分鐘,不需搖床→加100µl反應終止液(#F006)→分光光度計450/650nm讀數  
    結果分析:  
    標準液(0,2,8,25,75,200ng/mL)可用于制作標準曲線,標準液濃度相當于免疫反應HCP總濃度。根據測定的小孔中標準液吸光值繪制標準曲線。數據分析可以使用計算機選配曲線,例如點到點,三次樣本函數,或四參數邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值,這樣會出現顯著誤差。也可以手工繪圖,Y軸標注吸光值,X軸標注濃度。然后根據樣品吸光值計算出樣品中HCP濃度。(操作時每一濃度標準液都要滴定到兩個小孔中,以便計算平均分光光度值,樣品也需計算平均吸光值)。

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