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    細胞培養器的相關知識介紹

    更新時間:2022-05-11 點擊次數:705
       細胞的生長需要營養環境,用于維持細胞生長的營養基質稱為培養基。培養基按其物理狀態可分為液體培養基和固體培養基。液體培養基用于大規模的工業生產以及生理代謝等基本理論的研究工作。液體培養基中加入一定的凝固劑(如瓊脂)或固體培養物(如麩皮、大米等)便成為固體培養基。固體培養基為細胞的生長提供了一個營養及通氣的表面,在這樣一個營養表面上生產的細胞可形成單個菌落。因此,固體培養基在細胞的分離、鑒定、計數等方面起著相當重要的作用。從多細胞生物中分離所需要細胞和擴增獲得的細胞以及對細胞進行體外改造,觀察,必須解決細胞離體培養問題,同微生物細胞培養的難易相比,比較困難的是來自多細胞生物的單細胞培養,特別是動物細胞的培養。細胞培養泛指所有體外培養,其含義是指從動物活體體內取出組織,于模擬體內生理環境等特定的體內條件下,進行孵育培養,使之生存并生長。細胞培養工作現已廣泛應用于生物學、醫學、新藥研發等各個領域,成為zui重要的基礎科學之一。
      一、細胞培養器復蘇
      1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
      2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。
      3.把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動,使培養皿中的細胞均勻分布。
      4.標好細胞種類和日期、培養人名字等,放到37℃的5%CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。
      5.根據細胞增長速度2-3天換一次培養基。
      二、細胞培養器傳代
      1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
      2.把原有培養基吸掉。
      3.加適當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。
      4.細胞都變圓后加入等體積的含血清的培養基終止消化。
      5.用移液槍吹打細胞,讓細胞懸浮起來。
      6.把細胞吸到10ml或15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。
      7.倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來。
      8.根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續培養。
      三、細胞培養器凍存
      把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃夜,然后放到液氮灌中保存。
      凍存液的配制:70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
     

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