• 服務熱線

    15021010459
    技術文章
    當前位置:主頁 > 技術文章 > 細胞培養中檢測支原體的常用方法

    細胞培養中檢測支原體的常用方法

    更新時間:2021-04-06 點擊次數:2429

    支原體是1898年Nocard等發現的一種類似細菌但不具有細胞壁的原核微生物,能在無生命的人工培養基上生長繁殖,直徑50-300nm,能通過細菌濾器。支原體在過去曾稱之為類胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-like organism,PPLO),1967年正式命名為支原體。

     

    支原體(mycoplasma):又稱霉形體,為目前發現的原核生物,基因數量為480。支原體細胞中可見的細胞器是核糖體(支原體是原核細胞,原核細胞的細胞器只有核糖體)。支原體結構也比較簡單,多數呈球形,沒有細胞壁,只有三層結構的細胞膜,故具有較大的可變性。

     

    支原體這種微小的微生物,是細胞培養中令人頭疼的大問題。支原體污染可能來自培養基、血清或實驗操作者,會影響細胞生長率、細胞形態、基因表達、細胞代謝和細胞活力。支原體感染不易察覺,因此對培養細胞定期進行支原體檢測就非常重要。

    污染實驗室培養細胞的支原體主要有八種,但還沒有哪種檢測方法能夠單槍匹馬把這八種支原體都檢測出來。支原體非常頑強,通常用于細胞培養的絕大多數抗生素都對其無效。例如青霉素主要作用于細菌細胞壁,但支原體沒有細胞壁因此就不受影響。無懈可擊的細胞培養技術始終是預防支原體感染的方式,另外及時找出受到支原體感染的培養物也很重要,這樣才能在感染擴散前快速采取有效措施。下面就為大家介紹幾種在培養細胞中檢測支原體的方法。

     

    分離培養法

     

    分離培養法是支原體檢測的金標方法,其檢測度高。這種方法是從可疑的細胞培養體系中取樣,并接種到支原體生長的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體,它們就會在這種瓊脂平板上*生長,形成明顯可見的特征性菌落。分離培養法基本不會出現假陰性結果,因此被譽為支原體檢測金標準。不過分離培養法也存在兩個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間。二是盡管可以檢測絕大多數支原體種類,分離培養法也有力所不及的時候,例如支原體M. hyorhinis。

     

    DNA檢測法

     

    DNA檢測需要將可疑樣品與指示細胞共同培養,因此一般需要幾天時間。DNA檢測所用的指示細胞通常是細胞質區域較大的Vero細胞,如果原樣本中含有支原體,那么當細胞DNA被熒光染料(如Hoechst染料)染色時,就可以在指示細胞的核周圍觀察到熒光斑點或熒光顆粒。分離培養法用來檢測支原體M. hyorhinis菌株并不可靠,而DNA法可以準確的將其檢測出來。

       

     

    PCR  

     

    PCR法也可以檢測M. hyorhinis菌株,PCR法檢測支原體只需幾個小時,是但也是的支原體檢測方法。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本,其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過程中,支原體DNA會顯示為特異性條帶,以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測大多數支原體,但謹慎起見同時使用另一種檢測方法來進行驗證。

     

    酶學檢測和ELISA

     

    此外,也還存在一些其他支原體檢測方法。例如酶學檢測是將可疑樣本添加到特定底物中,在這一體系內支原體的酶可以將ADP轉化為ATP,隨后能利用ATP發光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測,以ELISA法為基礎的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標記探針或抗體,來檢測培養物中是否含有支原體。

     

     

    定期檢測法

     

    支原體感染會使培養細胞慢慢枯萎,因此對培養細胞定期進行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個月就應該進行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規化堅持下去,是細胞培養實驗室應對支原體感染的關鍵。

     

    2025 版權所有 © 重慶市華雅干細胞技術有限公司  備案號:渝ICP備14000349號-4 sitemap.xml 管理登陸 技術支持:化工儀器網

    地址:重慶市江北區金渝大道153號8棟20-14 傳真:023-63419626 郵件:sales@ys-bio.com

    重慶市華雅干細胞技術有限公司主要經營干細胞研究 干細胞治療產品 生物試劑 實驗耗材 藥物研發等產品。

    關注我們

    服務熱線

    400-021-2200

    掃一掃,關注我們

    主站蜘蛛池模板: 国产精品被窝福利一区| 久久国产乱子伦精品免费强| 国产精品无码成人午夜电影| 国产精品99久久不卡| 色妞ww精品视频7777| 久久99精品久久久久久水蜜桃| AAA级久久久精品无码片| 免费看一级毛片在线观看精品视频 | 国产精品 日韩欧美| 精品人妻码一区二区三区| 久久人搡人人玩人妻精品首页| 久久精品成人免费网站| 国产精品午夜久久| 精品国偷自产在线| 久久久精品无码专区不卡| 亚洲国产综合精品中文第一区| 日韩精品无码一区二区中文字幕 | 欧美性videofree精品| 人妻少妇精品中文字幕AV| 人妻少妇看A偷人无码精品| mm1313亚洲国产精品无码试看| 国产精品嫩草视频永久网址| 久久影院综合精品| 亚洲精品成人在线| 青青久久精品国产免费看| 亚洲AV无码乱码精品国产 | 亚洲欧美精品SUV| 精品久久久久久无码免费| 精品调教CHINESEGAY| 爽爽精品dvd蜜桃成熟时电影院| 亚洲AV日韩精品一区二区三区| 国产香蕉国产精品偷在线| 一区二区三区精品国产欧美| 国产精品久久久久久一区二区三区| 久久精品中文字幕无码绿巨人| 亚洲国产精品无码久久| 亚欧乱色国产精品免费视频| 欧美精品亚洲精品日韩专区| 精品视频久久久久| 国自产精品手机在线观看视频 | 国产精品拍天天在线|