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    U-937 人組織細胞淋巴瘤細胞  使用說明

    更新時間:2021-01-12 點擊次數:1360

                    

     

     

    產品名稱:U-937 人組織細胞淋巴瘤細胞

    英文名稱:Human Tissue Cell Lymphoma Cells ,U937

    貨號:SCCell-h6002(STR鑒定)

     

     

    細胞介紹

    該細胞是由Nilsson K實驗室于1974年從一名37歲的患有惡性組織細胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分離建立的。1979年來的研究顯示該細胞在人混合淋巴細胞培養物上清、佛波酯、Vit D3、γ-IFN、TNF和維A酸的誘導下可以向終末單核細胞分化。該細胞不合成免疫球蛋白,EBV陰性;可產生溶菌酶、β-2-微球蛋白,受PMA刺激后可產生TNF-α;表達C3R;可作轉染宿主;表達Fas,對TNF和抗Fas的抗體敏感。

     

    細胞特性

    1) 來源:淋巴瘤

    2) 形態:單核細胞,懸浮生長

    3) 含量:>1x106 細胞數

    4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

    5)  用途:僅供科研使用。

     

    運輸和保存

     

    干冰運輸及復蘇好存活細胞

    (1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

    (2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

     

    細胞接收后的處理

    1) 收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

    2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。

    3) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基)。

     

     

    一.培養基及培養凍存條件準備:

    1) 準備1640培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。

    2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。

    3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

     

    二. 細胞處理:

    1) 凍存細胞的復蘇:

    將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

    2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

     

    對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

    懸浮狀態下生長的細胞,可以通過向培養瓶中添加*培養基來維持細胞的生長狀態,一般情況下細胞密度維持在1×105~1×106個/mL(不同細胞對密度要求不同,)可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

    3) 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

     

    下面T25瓶為例;

    1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
    2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。
    3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

     

    注意事項

    1.收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

    2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態,100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。

    4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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