血清在細胞培養中常見問題

市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，使人難以分辨真偽及品質。好不容易在眾多*中挑選出誠心如意的產品后，那我們就可以安心使用了嘛？

不不不，下面小編給大家匯總小伙伴經常咨詢的一些問題。

? 正常情況下，融化后血清的外觀顏色應該是？
血清為動物來源，成分復雜，不同批次間會存在一些外觀上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。

? 血清應如何保存？
未拆封的血清應存放于-15至-20℃，避免反復凍融。拆封后的血清應無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產品質量證書標識的效期內均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。

? 血清的有效期是多久？
大部分康寧血清效期是5年，針對每個批次，請通過質檢文件確定具體效期日期。


? 血清應如何融解？
從冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化過程中不時旋轉（swirling mix）混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用

? 為什么有時血清中出現絮狀沉淀？是否需要去除？如何去除？
多種原因可能導致絮狀沉淀的形成，原因之一是融化過程中，脂蛋白聚集所致。該現象一般不會影響產品質量。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑，一般的是0.22um PES材質的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養基內一起過濾而不是直接過濾血清。

? 為什么存放于冰箱中的血清會出現沉淀？如何避免該現象？
在2-8°C條件下存放，血清中的多種蛋白或脂蛋白會形成肉眼可見的沉淀，如血纖蛋白（fibrin），單體時處于溶解狀態，在凍融過程中會發生聚集，形成肉眼可見的沉淀。但該現象一般不會影響血清的性能。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑，一般的是0.22um PES材質的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養基內一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現上述現象，建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反復凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長時間放置。

? 血清是否需要做滅活處理？
這取決于您的應用。
滅活過程中，會導致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時，才會考慮對血清進行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。見的情況是需要去除血清中的補體蛋白，因為補體在機體中參與細胞殺傷，巨噬細胞和淋巴細胞活化，肥大細胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過程，所以一般在免疫學相關研究中及肌細胞和干細胞的培養過程中需要對血清進行滅活處理。

? 如何進行血清滅活處理？
血清請先按上述“血清應如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質的影響，一次滅活的血清體積不宜過大。準備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計，加熱過程中不時輕輕旋轉混勻血清，當溫度計顯示達到56℃左右，開始計時。56 ℃水浴后，建議馬上轉移到冰上降溫。

? 為什么需要對血清進行gamma射線輻照？
gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。


? 什么情況下需要無Ca2+/Mg2+離子的PBS？
取決于您的研究應用。除了一些Ca2+/Mg2+會影響實驗結果的實驗以外，一般在胰酶消化前，建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細胞，因為Ca2+/Mg2+會抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細胞需要繼續培養，建議消化后用含Ca2+/Mg 2+的PBS清洗，因為Ca2+/Mg2+有助于細胞的貼壁過程。另外，若需要在緩沖液中長時間保存細胞，也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。

? 康寧無Ca2+/Mg2+離子的PBS和DPBS的區別是什么？
取決于您的研究應用。除了一些Ca2+/Mg2+會影響實驗結果的實驗以外，一般在胰酶消化前，建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細胞，因為Ca2+/Mg2+會抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細胞需要繼續培養，建議消化后用含Ca2+/Mg2+的PBS清洗，因為Ca2+/Mg2+有助于細胞的貼壁過程。另外，若需要在緩沖液中長時間保存細胞，也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。

? 康寧是否有注射級別（WFI）的水？
康寧細胞培養用水按照USP和/或EP 中對注射用水（WFI）的無菌要求進行質控，但康寧的該類產品為科研用產品，非臨床注射用水。

? 用于消化的胰酶中加EDTA的原因是什么？
鈣離子會抑制胰酶活性，EDTA作為鈣離子螯合劑，可以去除鈣離子，有助于胰酶更好發揮消化細胞的功能

? 為什么在使用胰酶前要先清洗貼壁細胞？
目前大部分情況下，細胞培養液中都含有一定量血清。血清中含有抑制胰酶活性的成分，如α1-antitrypsin 和α2-macroglobulin。建議使用無鈣鎂離子的緩沖液清洗細胞。