• 服務熱線

    15021010459
    技術文章
    當前位置:主頁 > 技術文章 > 細胞適應干細胞無血清培養基的方法

    細胞適應干細胞無血清培養基的方法

    更新時間:2019-01-16 點擊次數:984
    眾所皆知干細胞無血清培養基的基本配方:基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。 用于生物制藥和疫苗生產的細胞在體外培養時,多數呈貼壁生長或兼性貼壁生長;而當其在無血清、無蛋白培養基中生長時,由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細胞往往以懸浮形式生長。
    1.直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到干細胞無血清培養基(SFM)中。
    一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應干細胞無血清培養基。對于直接適應,接種細胞密度應該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時,傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時,細胞*適應了干細胞無血清培養基。每隔3~5天,當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了干細胞無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
    2.連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到干細胞無血清培養基(SFM)中,與直接適應相比較,連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。
    (1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75%有血清培養基:25%SFM 混合培養基中,傳代培養。
    (2)當細胞密度>5×10細胞/ml時,以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,在有血清培養基:SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。
    (3)以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,25%有血清培養基和75% SFM中傳代培養。
    (4)當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養基中傳代培養。
    (5)每隔3到5天,當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了干細胞無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
    建議備份前一次混合培養的培養物,直到每一次細胞適應了新的混合培養基。每一次減少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培養基中進行幾次傳代。
    在適應過程中,不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意,與有血清培養基相比,大部分SFM包含非常少的蛋白質,因而更易于受外界因素的影響。
    細胞培養適應替代血清:許多細胞利用連續適應方法能很好的適應,用包含FBS的的培養基和包含有替代血清的培養基1∶1(v∶v)的混合培養基培養細胞。通過下列的混合培養基的方式,連續幾代減少當前培養基的量:1∶2,1∶4,1∶16和100%替代培養基。每次適應改變血清比例時,傳代細胞2到3次。
    培養可以直接從FBS轉換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清,生長的延遲可能會發生,4允許進行2到3次的傳代,使生長率恢復到以前的水平。
    特別需要強調的是:配制無血清培養液必須使用高質量的水,如石英玻璃蒸餾器經三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為干細胞無血清培養基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子,既便水中的有毒物質含量甚微,也可能對細胞產生致死性損害。這是無血清培養能否成功的關鍵因素之一。

    2025 版權所有 © 重慶市華雅干細胞技術有限公司  備案號:渝ICP備14000349號-4 sitemap.xml 管理登陸 技術支持:化工儀器網

    地址:重慶市江北區金渝大道153號8棟20-14 傳真:023-63419626 郵件:sales@ys-bio.com

    重慶市華雅干細胞技術有限公司主要經營干細胞研究 干細胞治療產品 生物試劑 實驗耗材 藥物研發等產品。

    關注我們

    服務熱線

    400-021-2200

    掃一掃,關注我們

    主站蜘蛛池模板: 亚洲精品麻豆av| 久久久久无码精品国产不卡| 91精品成人免费国产| 精品国精品无码自拍自在线| 国产精品亚洲αv天堂无码| 国产精品扒开腿做爽爽爽视频 | 久久99国产精品二区不卡| 亚洲永久精品ww47| 久久久久国产精品麻豆AR影院 | 97久久精品无码一区二区| 四虎永久在线精品国产馆V视影院| 久久精品国产99国产电影网| 无码精品人妻一区二区三区免费看| 国产呦小j女精品视频| 国产精品欧美一区二区三区不卡 | 国内精品久久久久久99| 日本欧美国产精品第一页久久| 91精品一区二区综合在线| 国产精品免费AV片在线观看| 中文成人无字幕乱码精品区| 久久人人超碰精品CAOPOREN| 51精品资源视频在线播放| 国产成人精品一区二区三区免费| 中日精品无码一本二本三本| 精品亚洲欧美无人区乱码| 国产精品免费在线播放| 51国偷自产精品一区在线视频| 国产精品夜色一区二区三区 | 久久国产精品波多野结衣AV| 青青青青久久精品国产h| 2022年国产精品久久久久| 蜜国产精品jk白丝AV网站| 亚洲国产精品自在拍在线播放| 国产乱人伦精品一区二区在线观看| 久久精品国产亚洲麻豆| 99在线精品视频在线观看| 精品无码久久久久久午夜| 久久精品水蜜桃av综合天堂| 亚洲av永久无码精品国产精品 | 久久久一本精品99久久精品66| 无夜精品久久久久久|