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    MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定配色方案

    更新時間:2017-11-17 點擊次數(shù):10514

    MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定操作步驟

     

    流程

    準(zhǔn)備細(xì)胞——抗體染色——上機檢測

     

    1、準(zhǔn)備細(xì)胞:取培養(yǎng)的細(xì)胞離心(300 g/5min),棄去上清, 加入一定量PBS洗滌一次,棄去上清,彈散細(xì)胞,細(xì)胞重懸到5×106~10×106之間

     

    2、MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定配色方案

    取100 ml的細(xì)胞于EP管或流式管內(nèi),分三管染色

    *管 陽性配色 Anti-human CD90 FITC, Anti human CD105 APCAnti-human CD45 PE-Cy7各加5 ml

    第二管 陰性配色 Anti-human HLA-RA FITC, Anti-human CD34 PE-Cy7, Anti-human CD73 APC各加5 ml

    第三管同型對照 Mouse IgG1 K Isotype Control FITC 0.6 mlMouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 1.2 ml,Mouse IgG1 Isotype Control APC 1.2 ml

     

    配色依據(jù):細(xì)胞治療協(xié)會間充質(zhì)和組織干細(xì)胞委員會2006年提出了MSC鑒定的zui低標(biāo)準(zhǔn),關(guān)于細(xì)胞表型的要求是表達(dá)CD90, CD105和CD73不表達(dá)CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR;陽性指標(biāo)都需要染色,陰性指標(biāo)一般選擇2-3個指標(biāo),因為是做細(xì)胞表型鑒定,所以要配齊同型對照。

     

    3、加入相應(yīng)的抗體后混勻,建議彈管子,盡量不用槍頭直接吹打,室溫避光孵育15 min,染色過程中再混勻一次

    4、染色完成后加入1 ml的PBS洗滌細(xì)胞,離心300 g/5min

     

    5、棄去上清,彈散細(xì)胞,加入500 ml PBS重懸,上機檢測。

    注意:1、同型對照是根據(jù)染色抗體的用量來計算的,所以每種同型對照可能加入量可能不一樣(具體可看后文同型對照章節(jié)的介紹)。

       2、先上機檢測同型對照管,各檢測通道以這一管的信號設(shè)為陰性,在上機檢測抗體染色管。

       3、zui后結(jié)果的顯示用峰圖來表示,每種抗體的檢測結(jié)果都與對應(yīng)的同型對照染色結(jié)果疊加展示( overlay )。

     

    MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定結(jié)果

     

     

    注意:CD90表達(dá)量非常高,所以建議用FITC熒光染料,F(xiàn)ITC/PE-Cy7/APC這三種熒光染料之間幾乎沒有補償,所以這三種染料一起染色不需調(diào)節(jié)補償,如果是做臍帶干細(xì)胞的鑒定,CD105抗體選擇SN6克隆號,其他克隆號染色結(jié)果不好(某些克隆號染不上)。

     

    MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式配色抗體

     

    品牌

    產(chǎn)品編號

    產(chǎn)品名稱

    規(guī)格

    價格

    BioGems

    03011-50

      Anti-Human CD90 (Thy-1) FITC

    25 test/100 tests

    25 test

    1540元

    BioGems

    07111-77

      Anti-Human CD45 PE-Cy7

    25 test/100 tests

    25 test

    1680元

    BioGems

    17111-80

      Anti-Human CD105 (Endoglin) APC

    25 test/100 tests

    25 test

    2170元

    BioGems

    74111-50

      Anti-Human HLA-DR FITC

    25 test/100 tests

    25 test

    1400元

    BioGems

    06411-77

      Anti-Human CD34 PE-Cy7

    25 test/100 tests

    25 test

    2170元

    BioGems

    05811-80

      Anti-Human CD73 APC

    25 test/100 tests

    25 test

    1960元

     

     

    同型對照

    總價

    10920元

    BioGems

    44212-50

      Mouse IgG1 K Isotype Control  FITC

    100 mg

    1120元

    BioGems

    44212-77

      Mouse IgG1 Isotype Control  PE-Cy7

    100 mg 

    1890元

    BioGems

    44212-80

      Mouse IgG1 Isotype Control APC

    100 mg

    1750元

     

     

    MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定配色方案由Biogems提供。Biogems是PeproTech的流式抗體品牌,質(zhì)高價惠,現(xiàn)正進(jìn)行一系列*活動。

     

    MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式配色抗體產(chǎn)品由重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司授權(quán)代理,。重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司以“專注干細(xì)胞研究,提升干細(xì)胞品質(zhì)為發(fā)展理念,專業(yè)從事干細(xì)胞基礎(chǔ)研究、干細(xì)胞再生醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用研究及干細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。

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